二級種是將一級種移接在有二級種培養(yǎng)料中制成的菌種。二級種可以直接作生產種用。一般二級種轉接到同一種培養(yǎng)料上進行擴大培養(yǎng)就成生產種。二級種一般裝在750毫升蘑菇瓶或塑料袋中。
?。?）培養(yǎng)料的配制
配方一：稻草90%，麩皮（米糠）9%，石膏粉1%。配制方法是選取金黃色、無霉爛的干稻草，切成3厘米長，在清水浸泡12小時左右，使之充分吸水（只有吸透水的稻稈滅菌才容易徹底），撈起后擠掉多余的水分，按比例加入麩皮、石膏粉，充分拌勻，濕度以手握有水珠連續(xù)滴下為適宜。然后裝入瓶中，一面裝一面用木棒壓實，松緊要均勻適中，一般750毫升瓶裝干草75克。培養(yǎng)料裝至離瓶口約5厘米處為好，不宜太滿。接著用尖木棒在中央打一小洞，伸至瓶中部，以利接種。洗凈瓶口內外附著的培養(yǎng)基，擦干瓶口內壁后塞上棉塞，滅菌。
配方二：棉籽殼94%，麩皮5%，石膏粉1%，石灰6%。配制方法：將棉籽殼預濕后加入輔料，含水量在60%左右即可裝瓶（袋）。
配方三：麥粒98.5%，石膏粉1%，碳酸鈣0.5%。配制方法：先將麥粒用12%～15%的石灰水浸泡10小時左右，加熱煮沸15分鐘，然后過濾，讓麥粒稍微收干，冷卻后拌入石膏粉和碳酸鈣，立即裝瓶。裝瓶時瓶底放一薄層濕度為30%～40%的礱糠，瓶肩處裝一薄層棉籽殼或礱糠為封口料，以減少雜菌污染。其余培養(yǎng)料的裝瓶方法同配方一。此法宜做二級種，如做生產種，由于營養(yǎng)較好易引起污染。
?。?）滅菌 裝好培養(yǎng)料的瓶（袋）要當天滅菌，以免料發(fā)酵變質。滅菌壓力為137～147千帕，滅菌1.5～2小時。如用常壓滅菌灶，則需將水煮沸后保持8小時，并悶一夜，也能達到滅菌目的。
?。?）接種 滅菌后隨即把菌種瓶（袋）取出送至接種箱或超凈臺，冷卻后即可接種。一般每支一級種接4～8瓶二級種，每瓶二級種接60瓶左右生產種。
（4）培養(yǎng) 接種后將菌種全部移至培養(yǎng)箱或培養(yǎng)室。室溫以30～32℃為宜，24小時后即可檢查。在菌絲封口前最好每天檢查一遍，及時揀去污染的菌種。菌種長滿瓶后3～5天為最適菌齡，750毫升蘑菇瓶的菌齡25～30天。特別要指出的是培養(yǎng)室要清潔、通風，室外環(huán)境也要清潔。
?。?）培養(yǎng)料的配制
配方一：稻草90%，麩皮（米糠）9%，石膏粉1%。配制方法是選取金黃色、無霉爛的干稻草，切成3厘米長，在清水浸泡12小時左右，使之充分吸水（只有吸透水的稻稈滅菌才容易徹底），撈起后擠掉多余的水分，按比例加入麩皮、石膏粉，充分拌勻，濕度以手握有水珠連續(xù)滴下為適宜。然后裝入瓶中，一面裝一面用木棒壓實，松緊要均勻適中，一般750毫升瓶裝干草75克。培養(yǎng)料裝至離瓶口約5厘米處為好，不宜太滿。接著用尖木棒在中央打一小洞，伸至瓶中部，以利接種。洗凈瓶口內外附著的培養(yǎng)基，擦干瓶口內壁后塞上棉塞，滅菌。
配方二：棉籽殼94%，麩皮5%，石膏粉1%，石灰6%。配制方法：將棉籽殼預濕后加入輔料，含水量在60%左右即可裝瓶（袋）。
配方三：麥粒98.5%，石膏粉1%，碳酸鈣0.5%。配制方法：先將麥粒用12%～15%的石灰水浸泡10小時左右，加熱煮沸15分鐘，然后過濾，讓麥粒稍微收干，冷卻后拌入石膏粉和碳酸鈣，立即裝瓶。裝瓶時瓶底放一薄層濕度為30%～40%的礱糠，瓶肩處裝一薄層棉籽殼或礱糠為封口料，以減少雜菌污染。其余培養(yǎng)料的裝瓶方法同配方一。此法宜做二級種，如做生產種，由于營養(yǎng)較好易引起污染。
?。?）滅菌 裝好培養(yǎng)料的瓶（袋）要當天滅菌，以免料發(fā)酵變質。滅菌壓力為137～147千帕，滅菌1.5～2小時。如用常壓滅菌灶，則需將水煮沸后保持8小時，并悶一夜，也能達到滅菌目的。
?。?）接種 滅菌后隨即把菌種瓶（袋）取出送至接種箱或超凈臺，冷卻后即可接種。一般每支一級種接4～8瓶二級種，每瓶二級種接60瓶左右生產種。
（4）培養(yǎng) 接種后將菌種全部移至培養(yǎng)箱或培養(yǎng)室。室溫以30～32℃為宜，24小時后即可檢查。在菌絲封口前最好每天檢查一遍，及時揀去污染的菌種。菌種長滿瓶后3～5天為最適菌齡，750毫升蘑菇瓶的菌齡25～30天。特別要指出的是培養(yǎng)室要清潔、通風，室外環(huán)境也要清潔。
