1、金針菇菌種購置及生產(chǎn)用主要設(shè)施設(shè)備
1．1主要設(shè)施。接種室、培養(yǎng)室、操作室、貯藏室，其面積大小以生產(chǎn)規(guī)模而定。
1．2主要設(shè)備。超凈工作臺(或接種箱)、恒溫箱、操作臺、轉(zhuǎn)椅、高壓滅菌鍋、常壓滅菌鍋、鋼精鍋、天平、臺秤、量筒、玻璃瓶、試管等。
1．3菌種選購。選購優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)、抗逆性強、性狀穩(wěn)定、生長快、純度高、無雜菌、無病蟲害的優(yōu)良品系。
2、各菌種培養(yǎng)基選擇制作
2．1母種斜面培養(yǎng)基的制作：
配方①馬鈴薯200--250克，瓊脂20克、白糖20克、水1000毫升、pH值調(diào)至6．5。②馬鈴薯200--250克、瓊脂20克、葡萄糖20克、水1000毫升、pH值調(diào)至6．5。③馬鈴薯200--250克、硫酸鎂5克、白糖20克、維生素B1(B2)100毫升、磷酸二氫鉀2．50克、瓊脂20克、水1000毫升、pH值調(diào)至6．5。
制作：把馬鈴薯切成片放鋼精鍋中煮沸30分鐘，用四層紗布過濾取汁，加入瓊脂及其他料，攪拌溶解后加入糖，再加水至1000毫升，移入培養(yǎng)試管，容量為管長1／5。
2．2原種、栽培種培養(yǎng)基的制作：
配方
①木屑培養(yǎng)基：闊葉樹木屑73％，蔗糖1％、細(xì)米糠(或麥皮)2．50％、碳酸鈣1％、水料比1：1．20--1．30。
②棉子殼培養(yǎng)基：棉子殼88％、蔗糖1％、細(xì)末糖(或麥皮)10％，碳酸鈣10％、水料比同。
③麥粒培養(yǎng)基：麥粒(或玉米粒也可以)99％碳酸鈣1％，水料比1：1．20。
制作：按上述比例要求稱取各樣配料后混合。糖和化學(xué)物品用水溶化后加入料中拌勻，并將溶化用水量記入水料比中。棉籽殼在混合前拌水預(yù)濕；麥粒混合前浸泡再入鍋煮熟，以麥粒不破肚為宜，撈出晾干后于其他料混合。全部料混合配好后裝瓶，裝量為瓶容量的1／3。
3、液體菌種制作
配方①葡萄糖3％、玉米粉1％、豆餅粉2％、碳酸鈣0．20％、磷酸二氫鉀0．10％、酵母粉0．50％、硫酸鎂0．05％，將各成分溶于水中混勻，配制成懸浮液，煮沸30分鐘后取上清液定溶，裝入盛有10粒小玻璃珠的500毫升三角瓶中。
配方②馬鈴薯20％、蛋白質(zhì)0．20％、葡萄糖20％、磷酸二氫鉀0．05％、硫酸鎂0．05％、氯化鉀0．01％、馬鈴薯按常規(guī)方法提取濾液，添加其他成分后定溶裝入瓶。
配方③玉米粉5％、酵母粉0．50％、蔗糖4％、碳酸鈣0．20％、VB1毫克、制作方法與配方①相同。
3．1培養(yǎng)基滅菌與設(shè)施設(shè)備消毒
3．2母種斜面培養(yǎng)基。液體培養(yǎng)基高壓滅菌用每千方厘米1．10千克，在121℃溫度下滅菌30分鐘，固體菌種培養(yǎng)基在滅菌后立即排放斜面，斜面長度占試管長度1／2為宜。
3．3原種、栽培種培養(yǎng)基。高壓滅菌用
每千方厘米1．50千克壓力，在121℃溫度下滅菌1小時。麥粒為原料的培養(yǎng)基適當(dāng)延長滅菌時間。也可用常壓蒸汽滅菌，即在100℃溫度下持續(xù)滅菌8小時。
3．4設(shè)施消毒。接種室、培養(yǎng)室、操作室用福爾馬林加熱熏蒸，也可用硫磺粉燃燒熏蒸，用量福爾馬林每立方米空間10毫升，硫磺粉每立方米空間15克；用次氯酸鈣(每千方米20--40克)水溶液，2％--3％來蘇兒噴灑地面和墻壁。
3．5設(shè)備消毒。超凈工作臺及其各種工具用70％酒精或5％石碳酸0．25％新潔爾滅浸泡擦洗。接種前，打開紫外線燈滅菌15分鐘。
4、菌種的接種與培養(yǎng)
4．1母種的接種與培養(yǎng)。接種時試管(瓶口)朝下并靠近酒精燈火焰處，用接種針把母種試管內(nèi)的菌絲體連同原培養(yǎng)基切成0．50厘米x0．50厘米小塊移入1支新試管培養(yǎng)基斜面上，塞緊棉花，放到23℃恒溫箱或培養(yǎng)室中培養(yǎng)8--10天菌絲即長滿斜面。
4．2原種、栽培種的接種與培養(yǎng)。用接種針把母種試管內(nèi)的菌絲體挑取1平方厘米菌種塊接入原種(或栽培種)瓶中的培養(yǎng)基上，同樣瓶口靠近酒精燈火焰處，速度要快。接好后塞上棉花，放到23℃培養(yǎng)室中培養(yǎng)。
4．3液體菌種的接種與培養(yǎng)在高壓滅菌后的液體培養(yǎng)基內(nèi)接入2平方厘米生長旺盛的斜面母種一塊，使汽生菌絲的一面向上懸浮于液面，在23℃溫度下靜態(tài)培養(yǎng)2--3天，再置于復(fù)式搖瓶機(振蕩頻率80--100次／分鐘)上振蕩培養(yǎng)3--4天，當(dāng)液體呈淺黃色、清澈透明、具有香味時，移入消毒后的接種室，在酒精燈火焰口處將液體倒入經(jīng)消毒的栽培種培養(yǎng)基表面，量為每瓶10--15毫升，然后置于23℃氣溫的培養(yǎng)室中培養(yǎng)27天左右即可成為栽培種使用。液體菌種的特點是在原種量小的情況下作為原種使用，采用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)僅需1周左右，比培養(yǎng)固體原種可縮短4倍的時間，而且菌齡一致，菌絲健狀，生活力旺盛。
5、金針菇菌種的保藏
5．1低溫保藏。把長滿斜面的菌種放在4℃冰箱中，每隔5個月再移植1次。
5．2常溫保存。用木屑配制的培養(yǎng)基菌絲長滿后用石臘封閉棉塞，常溫下保存。
5．3液氮保藏。菌種貯藏在-130---193℃的液氮罐內(nèi)。
1．1主要設(shè)施。接種室、培養(yǎng)室、操作室、貯藏室，其面積大小以生產(chǎn)規(guī)模而定。
1．2主要設(shè)備。超凈工作臺(或接種箱)、恒溫箱、操作臺、轉(zhuǎn)椅、高壓滅菌鍋、常壓滅菌鍋、鋼精鍋、天平、臺秤、量筒、玻璃瓶、試管等。
1．3菌種選購。選購優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)、抗逆性強、性狀穩(wěn)定、生長快、純度高、無雜菌、無病蟲害的優(yōu)良品系。
2、各菌種培養(yǎng)基選擇制作
2．1母種斜面培養(yǎng)基的制作：
配方①馬鈴薯200--250克，瓊脂20克、白糖20克、水1000毫升、pH值調(diào)至6．5。②馬鈴薯200--250克、瓊脂20克、葡萄糖20克、水1000毫升、pH值調(diào)至6．5。③馬鈴薯200--250克、硫酸鎂5克、白糖20克、維生素B1(B2)100毫升、磷酸二氫鉀2．50克、瓊脂20克、水1000毫升、pH值調(diào)至6．5。
制作：把馬鈴薯切成片放鋼精鍋中煮沸30分鐘，用四層紗布過濾取汁，加入瓊脂及其他料，攪拌溶解后加入糖，再加水至1000毫升，移入培養(yǎng)試管，容量為管長1／5。
2．2原種、栽培種培養(yǎng)基的制作：
配方
①木屑培養(yǎng)基：闊葉樹木屑73％，蔗糖1％、細(xì)米糠(或麥皮)2．50％、碳酸鈣1％、水料比1：1．20--1．30。
②棉子殼培養(yǎng)基：棉子殼88％、蔗糖1％、細(xì)末糖(或麥皮)10％，碳酸鈣10％、水料比同。
③麥粒培養(yǎng)基：麥粒(或玉米粒也可以)99％碳酸鈣1％，水料比1：1．20。
制作：按上述比例要求稱取各樣配料后混合。糖和化學(xué)物品用水溶化后加入料中拌勻，并將溶化用水量記入水料比中。棉籽殼在混合前拌水預(yù)濕；麥粒混合前浸泡再入鍋煮熟，以麥粒不破肚為宜，撈出晾干后于其他料混合。全部料混合配好后裝瓶，裝量為瓶容量的1／3。
3、液體菌種制作
配方①葡萄糖3％、玉米粉1％、豆餅粉2％、碳酸鈣0．20％、磷酸二氫鉀0．10％、酵母粉0．50％、硫酸鎂0．05％，將各成分溶于水中混勻，配制成懸浮液，煮沸30分鐘后取上清液定溶，裝入盛有10粒小玻璃珠的500毫升三角瓶中。
配方②馬鈴薯20％、蛋白質(zhì)0．20％、葡萄糖20％、磷酸二氫鉀0．05％、硫酸鎂0．05％、氯化鉀0．01％、馬鈴薯按常規(guī)方法提取濾液，添加其他成分后定溶裝入瓶。
配方③玉米粉5％、酵母粉0．50％、蔗糖4％、碳酸鈣0．20％、VB1毫克、制作方法與配方①相同。
3．1培養(yǎng)基滅菌與設(shè)施設(shè)備消毒
3．2母種斜面培養(yǎng)基。液體培養(yǎng)基高壓滅菌用每千方厘米1．10千克，在121℃溫度下滅菌30分鐘，固體菌種培養(yǎng)基在滅菌后立即排放斜面，斜面長度占試管長度1／2為宜。
3．3原種、栽培種培養(yǎng)基。高壓滅菌用
每千方厘米1．50千克壓力，在121℃溫度下滅菌1小時。麥粒為原料的培養(yǎng)基適當(dāng)延長滅菌時間。也可用常壓蒸汽滅菌，即在100℃溫度下持續(xù)滅菌8小時。
3．4設(shè)施消毒。接種室、培養(yǎng)室、操作室用福爾馬林加熱熏蒸，也可用硫磺粉燃燒熏蒸，用量福爾馬林每立方米空間10毫升，硫磺粉每立方米空間15克；用次氯酸鈣(每千方米20--40克)水溶液，2％--3％來蘇兒噴灑地面和墻壁。
3．5設(shè)備消毒。超凈工作臺及其各種工具用70％酒精或5％石碳酸0．25％新潔爾滅浸泡擦洗。接種前，打開紫外線燈滅菌15分鐘。
4、菌種的接種與培養(yǎng)
4．1母種的接種與培養(yǎng)。接種時試管(瓶口)朝下并靠近酒精燈火焰處，用接種針把母種試管內(nèi)的菌絲體連同原培養(yǎng)基切成0．50厘米x0．50厘米小塊移入1支新試管培養(yǎng)基斜面上，塞緊棉花，放到23℃恒溫箱或培養(yǎng)室中培養(yǎng)8--10天菌絲即長滿斜面。
4．2原種、栽培種的接種與培養(yǎng)。用接種針把母種試管內(nèi)的菌絲體挑取1平方厘米菌種塊接入原種(或栽培種)瓶中的培養(yǎng)基上，同樣瓶口靠近酒精燈火焰處，速度要快。接好后塞上棉花，放到23℃培養(yǎng)室中培養(yǎng)。
4．3液體菌種的接種與培養(yǎng)在高壓滅菌后的液體培養(yǎng)基內(nèi)接入2平方厘米生長旺盛的斜面母種一塊，使汽生菌絲的一面向上懸浮于液面，在23℃溫度下靜態(tài)培養(yǎng)2--3天，再置于復(fù)式搖瓶機(振蕩頻率80--100次／分鐘)上振蕩培養(yǎng)3--4天，當(dāng)液體呈淺黃色、清澈透明、具有香味時，移入消毒后的接種室，在酒精燈火焰口處將液體倒入經(jīng)消毒的栽培種培養(yǎng)基表面，量為每瓶10--15毫升，然后置于23℃氣溫的培養(yǎng)室中培養(yǎng)27天左右即可成為栽培種使用。液體菌種的特點是在原種量小的情況下作為原種使用，采用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)僅需1周左右，比培養(yǎng)固體原種可縮短4倍的時間，而且菌齡一致，菌絲健狀，生活力旺盛。
5、金針菇菌種的保藏
5．1低溫保藏。把長滿斜面的菌種放在4℃冰箱中，每隔5個月再移植1次。
5．2常溫保存。用木屑配制的培養(yǎng)基菌絲長滿后用石臘封閉棉塞，常溫下保存。
5．3液氮保藏。菌種貯藏在-130---193℃的液氮罐內(nèi)。
