一、同期發(fā)情技術(shù)
同期發(fā)情又叫做同步發(fā)情或發(fā)情控制技術(shù)。它是利用某些激素人為地控制并調(diào)整若干(供、受體)母牛在一定時間內(nèi)集中發(fā)情，它可以對受控制的母牛不經(jīng)過發(fā)情檢查即在預定時間內(nèi)同時受精。
現(xiàn)行的同期發(fā)情技術(shù)有兩途徑，都是通過控制黃體――延長或縮短其壽命，降低孕酮水平，使母牛擺脫孕激素控制的時間一致，從而導致卵泡同時發(fā)育，達到同期發(fā)情的目的。
同期發(fā)情的處理方法主要有：
1.孕激素處理：孕激素處理是人為地造成黃體期，控制發(fā)情。母牛處理一定時間后，同時停藥即可引起母牛發(fā)情，此類孕激素包括孕酮及其合成類似物，如甲孕酮、炔諾酮、氯地孕酮、18―甲基炔諾酮等。投藥方式有陰道栓塞，皮下埋植等。
2.前列腺素(PG)及其類似物處理，前列腺素處理是溶解卵巢上的黃體，中斷周期黃體發(fā)育，使牛同期發(fā)情。
由于前列腺素如氯前列烯醇等僅對卵巢上有功能性黃體的母牛起作用，而對群體來說，黃體存在于發(fā)情周期的各個階段，所以必須間隔11天后再用藥1次，才能使群體達到同期化。前列腺素的投藥方式有肌注、宮腔或?qū)m頸注入。
二、胚胎移植技術(shù)
胚胎移植是對經(jīng)超數(shù)排卵處理的供體母牛，用手術(shù)或非手術(shù)手段從其輸卵管或子宮內(nèi)取出若干早期胚胎，移植到經(jīng)過同期發(fā)情處理的另外一群受體母牛的相同部位，以達到產(chǎn)生供體牛后代的目的。
1980年英國劍橋大學的科學家Water Heap從安哥拉母兔上取出4細胞期的2枚胚胎移植到比利時兔的輸卵管內(nèi)獲得成功。1951年胚胎移植在牛上獲得成功。我國胚胎移植技術(shù)起步較晚,最早開始于1973年,1978年在牛上胚胎移植獲得成功。目前國外鮮胚移植妊娠率可達60%以上，我國鮮胚移植受胎率可達50%～60%，凍胚為40%～45%。
(一)超數(shù)排卵
超數(shù)排卵簡稱超排，指在母牛發(fā)情周期的適宜時間，用促性腺激素處理母牛，使卵巢比在自然情況下有較多的卵泡發(fā)育并排出多個有受精能力的卵子。超排技術(shù)的應用，可充分發(fā)揮優(yōu)良種母(供體)牛的作用，加速牛群改良，同時也是胚胎移植的重要環(huán)節(jié)。
1. 常用的超排處理方法：
(1)PMSG+PGF2α法在性周期第8～12天內(nèi)1次肌注PMSG 2000～3000IU(老年牛劑量可大大一些)，48小時后肌注PGF2α15～25毫克或子宮灌注2～3毫克，以后的2～4天內(nèi)，多數(shù)母牛發(fā)情，但PMSG不宜PGF2α同時注射，否則會導致排卵率降低。
(2)FSH+PGF2α法在性周期第8～12天內(nèi)1次肌注FSH每日2次，連注3～4天，總劑量30～40毫克(第一次用量稍多，以后逐日降低)，在第五次注射的同時，注射PGF2α15～25毫克。在有必要的情況下，可在牛發(fā)情后肌注GnRH(LRH-A2或LRH―A3)200～300微克。
(3)促排卵類藥物經(jīng)超排處理的供體，卵巢上發(fā)育的卵泡數(shù)要多于自然發(fā)情的卵子數(shù)，僅依靠內(nèi)源性促排卵激素不能達到超排目的。因此，在供體母畜出現(xiàn)發(fā)情時，需要靜脈注射外源性hCG或GnRH、LH等，以增強排卵效果，減少卵巢上殘余的卵泡數(shù)。
(4)孕激素如用孕激素作超排預處理，可以提高母牛對促性腺激素的敏感性。
超排處理的時期應選擇在發(fā)情周期的后期，即黃體消退時期，此時卵巢正處于由黃體期向卵泡期過渡。
2.提高反復進行超排處理的措施
超排應用的PMSG、HCG、FSH及LH均為大分子蛋白質(zhì)制劑，對母牛作反復多次注射后體內(nèi)會產(chǎn)生相應的抗體，使卵巢的反應逐漸減退，超排效果也隨之降低。
(1)增加藥物的劑量在第二次超排處理時，可將促性腺激素的劑量加大，以到達正常的超排處理。
(2)間隔一定時間處理母牛每進行一次超排處理，使卵巢經(jīng)歷一次沉重的生理負擔，需經(jīng)一定時期才能恢復正常的生理機能。所以，在給供體體母牛作第二次處理的間隔時期應為60～80天，第三次處理時間則需長到100天，在每一次沖取胚胎結(jié)束后，應向子宮內(nèi)灌注PGF2α以加速卵巢的恢復。
(3)更換激素制劑當連續(xù)兩次使用同一種藥物進行處理時，為了保持卵巢對激素的敏感性，可以更換另一種激素進行超排處理，以獲得較好效果。
(二)胚胎移植
1.胚胎移植的意義
(1)通過胚胎移植可以充分發(fā)揮優(yōu)良母畜的繁殖潛力，使優(yōu)良供體免去很長的懷孕期，縮短繁殖周期，生產(chǎn)更多的優(yōu)秀后代個體。2)利用超數(shù)排卵，一次可獲得更多的優(yōu)良胚胎縮短世代間隔，及早進行后裔測定。
(3)提高生產(chǎn)效率,誘發(fā)肉牛懷雙胎，即向已配種的母畜(排卵的對側(cè)子宮角)移植一個胚胎，或者向未配種的母畜移植兩個胚胎。
(4)有利于防治疾病,減少由于本交引起的生殖疾病。
(5)胚胎的冷凍保存可以使胚胎移植跨地域和時空，大大節(jié)約購買和運輸活畜的費用，還可以從養(yǎng)母得到免疫能力，更容易適應本地區(qū)的生態(tài)環(huán)境。
(6)胚胎的冷凍保存，可以避免因遭受意外災害而滅絕，且費用遠遠低于活畜保存，并且它與冷凍精液可共同構(gòu)成動物優(yōu)良性狀的基因庫。
(7)胚胎移植是研究受精作用,胚胎學和遺傳學等理論問題的一種良好手段。
2.胚胎移植的生理學基礎(chǔ)和基本原則
(1)生理學基礎(chǔ)
?、倌概０l(fā)情后生殖器官的發(fā)育母牛的發(fā)情，配種都是受精妊娠的前奏，而發(fā)情配種的結(jié)局自然地就是受精和妊娠。大多數(shù)發(fā)情的母牛，發(fā)情后不論是否配種，或配種后是否受精，在最初一段時期(周期黃體期)，生殖系統(tǒng)均處于受精后的生理狀態(tài)下，此時高水平孕酮使子宮內(nèi)膜的組織增生和分泌機能增加及生理生化發(fā)生特異性變化，在生理機能上妊娠與未孕并無區(qū)別。這就給胚胎成功的移植和在受體內(nèi)正常發(fā)育提供了理論依據(jù)。
?、谠缙谂咛サ挠坞x狀態(tài)早期胚胎發(fā)育和子宮沒有建立實質(zhì)性聯(lián)系，這使其可以脫離活體而被取出成為可能。
?、叟咛ヒ浦膊淮嬖诿庖邌栴}受體母畜的生殖道(子宮和輸卵管)對于具有外來抗原物質(zhì)的胎盤和胎膜組織，在同一物種之內(nèi)，無排斥現(xiàn)象。
?、芘咛ズ褪荏w之間建立有效聯(lián)系，保證胎兒以后的正常發(fā)育。
?、菖咛サ倪z傳特性不受受體的影響。
(2)胚胎移植的基本原則
?、倥咛ヒ浦睬昂笏幁h(huán)境的同一性
a.供體和受體在分類學上的相同屬性，即兩者須屬于同一物種。
b.動物生理上的一致性。即受體和供體在發(fā)情時間上的同期性，一般要求相差24小時以內(nèi)。
c.動物解剖部位的一致性。即移植后的胚胎與移植前所處的空間環(huán)境相似性。
?、谂咛グl(fā)育的期限胚胎采集和移植的期限(胚胎的日齡)不能超過周期黃體的壽命，最快要在周期黃體退化之前數(shù)日進行移植。通常在供體發(fā)情配種后3～8天收集胚胎，受體同時接受移植。
?、叟咛サ馁|(zhì)量胚胎不應受到任何不良因素(物理、化學和微生物等)的影響而危及生命力，必須經(jīng)過鑒定確認為正常者。
?、芄┦荏w的狀況供體的生產(chǎn)性能，經(jīng)濟價值均須大于受體，兩者均須健康無病。此外，還需強調(diào)的是胚胎移植只是空間位置的變換，而不是生理環(huán)境的改變。
同期發(fā)情又叫做同步發(fā)情或發(fā)情控制技術(shù)。它是利用某些激素人為地控制并調(diào)整若干(供、受體)母牛在一定時間內(nèi)集中發(fā)情，它可以對受控制的母牛不經(jīng)過發(fā)情檢查即在預定時間內(nèi)同時受精。
現(xiàn)行的同期發(fā)情技術(shù)有兩途徑，都是通過控制黃體――延長或縮短其壽命，降低孕酮水平，使母牛擺脫孕激素控制的時間一致，從而導致卵泡同時發(fā)育，達到同期發(fā)情的目的。
同期發(fā)情的處理方法主要有：
1.孕激素處理：孕激素處理是人為地造成黃體期，控制發(fā)情。母牛處理一定時間后，同時停藥即可引起母牛發(fā)情，此類孕激素包括孕酮及其合成類似物，如甲孕酮、炔諾酮、氯地孕酮、18―甲基炔諾酮等。投藥方式有陰道栓塞，皮下埋植等。
2.前列腺素(PG)及其類似物處理，前列腺素處理是溶解卵巢上的黃體，中斷周期黃體發(fā)育，使牛同期發(fā)情。
由于前列腺素如氯前列烯醇等僅對卵巢上有功能性黃體的母牛起作用，而對群體來說，黃體存在于發(fā)情周期的各個階段，所以必須間隔11天后再用藥1次，才能使群體達到同期化。前列腺素的投藥方式有肌注、宮腔或?qū)m頸注入。
二、胚胎移植技術(shù)
胚胎移植是對經(jīng)超數(shù)排卵處理的供體母牛，用手術(shù)或非手術(shù)手段從其輸卵管或子宮內(nèi)取出若干早期胚胎，移植到經(jīng)過同期發(fā)情處理的另外一群受體母牛的相同部位，以達到產(chǎn)生供體牛后代的目的。
1980年英國劍橋大學的科學家Water Heap從安哥拉母兔上取出4細胞期的2枚胚胎移植到比利時兔的輸卵管內(nèi)獲得成功。1951年胚胎移植在牛上獲得成功。我國胚胎移植技術(shù)起步較晚,最早開始于1973年,1978年在牛上胚胎移植獲得成功。目前國外鮮胚移植妊娠率可達60%以上，我國鮮胚移植受胎率可達50%～60%，凍胚為40%～45%。
(一)超數(shù)排卵
超數(shù)排卵簡稱超排，指在母牛發(fā)情周期的適宜時間，用促性腺激素處理母牛，使卵巢比在自然情況下有較多的卵泡發(fā)育并排出多個有受精能力的卵子。超排技術(shù)的應用，可充分發(fā)揮優(yōu)良種母(供體)牛的作用，加速牛群改良，同時也是胚胎移植的重要環(huán)節(jié)。
1. 常用的超排處理方法：
(1)PMSG+PGF2α法在性周期第8～12天內(nèi)1次肌注PMSG 2000～3000IU(老年牛劑量可大大一些)，48小時后肌注PGF2α15～25毫克或子宮灌注2～3毫克，以后的2～4天內(nèi)，多數(shù)母牛發(fā)情，但PMSG不宜PGF2α同時注射，否則會導致排卵率降低。
(2)FSH+PGF2α法在性周期第8～12天內(nèi)1次肌注FSH每日2次，連注3～4天，總劑量30～40毫克(第一次用量稍多，以后逐日降低)，在第五次注射的同時，注射PGF2α15～25毫克。在有必要的情況下，可在牛發(fā)情后肌注GnRH(LRH-A2或LRH―A3)200～300微克。
(3)促排卵類藥物經(jīng)超排處理的供體，卵巢上發(fā)育的卵泡數(shù)要多于自然發(fā)情的卵子數(shù)，僅依靠內(nèi)源性促排卵激素不能達到超排目的。因此，在供體母畜出現(xiàn)發(fā)情時，需要靜脈注射外源性hCG或GnRH、LH等，以增強排卵效果，減少卵巢上殘余的卵泡數(shù)。
(4)孕激素如用孕激素作超排預處理，可以提高母牛對促性腺激素的敏感性。
超排處理的時期應選擇在發(fā)情周期的后期，即黃體消退時期，此時卵巢正處于由黃體期向卵泡期過渡。
2.提高反復進行超排處理的措施
超排應用的PMSG、HCG、FSH及LH均為大分子蛋白質(zhì)制劑，對母牛作反復多次注射后體內(nèi)會產(chǎn)生相應的抗體，使卵巢的反應逐漸減退，超排效果也隨之降低。
(1)增加藥物的劑量在第二次超排處理時，可將促性腺激素的劑量加大，以到達正常的超排處理。
(2)間隔一定時間處理母牛每進行一次超排處理，使卵巢經(jīng)歷一次沉重的生理負擔，需經(jīng)一定時期才能恢復正常的生理機能。所以，在給供體體母牛作第二次處理的間隔時期應為60～80天，第三次處理時間則需長到100天，在每一次沖取胚胎結(jié)束后，應向子宮內(nèi)灌注PGF2α以加速卵巢的恢復。
(3)更換激素制劑當連續(xù)兩次使用同一種藥物進行處理時，為了保持卵巢對激素的敏感性，可以更換另一種激素進行超排處理，以獲得較好效果。
(二)胚胎移植
1.胚胎移植的意義
(1)通過胚胎移植可以充分發(fā)揮優(yōu)良母畜的繁殖潛力，使優(yōu)良供體免去很長的懷孕期，縮短繁殖周期，生產(chǎn)更多的優(yōu)秀后代個體。2)利用超數(shù)排卵，一次可獲得更多的優(yōu)良胚胎縮短世代間隔，及早進行后裔測定。
(3)提高生產(chǎn)效率,誘發(fā)肉牛懷雙胎，即向已配種的母畜(排卵的對側(cè)子宮角)移植一個胚胎，或者向未配種的母畜移植兩個胚胎。
(4)有利于防治疾病,減少由于本交引起的生殖疾病。
(5)胚胎的冷凍保存可以使胚胎移植跨地域和時空，大大節(jié)約購買和運輸活畜的費用，還可以從養(yǎng)母得到免疫能力，更容易適應本地區(qū)的生態(tài)環(huán)境。
(6)胚胎的冷凍保存，可以避免因遭受意外災害而滅絕，且費用遠遠低于活畜保存，并且它與冷凍精液可共同構(gòu)成動物優(yōu)良性狀的基因庫。
(7)胚胎移植是研究受精作用,胚胎學和遺傳學等理論問題的一種良好手段。
2.胚胎移植的生理學基礎(chǔ)和基本原則
(1)生理學基礎(chǔ)
?、倌概０l(fā)情后生殖器官的發(fā)育母牛的發(fā)情，配種都是受精妊娠的前奏，而發(fā)情配種的結(jié)局自然地就是受精和妊娠。大多數(shù)發(fā)情的母牛，發(fā)情后不論是否配種，或配種后是否受精，在最初一段時期(周期黃體期)，生殖系統(tǒng)均處于受精后的生理狀態(tài)下，此時高水平孕酮使子宮內(nèi)膜的組織增生和分泌機能增加及生理生化發(fā)生特異性變化，在生理機能上妊娠與未孕并無區(qū)別。這就給胚胎成功的移植和在受體內(nèi)正常發(fā)育提供了理論依據(jù)。
?、谠缙谂咛サ挠坞x狀態(tài)早期胚胎發(fā)育和子宮沒有建立實質(zhì)性聯(lián)系，這使其可以脫離活體而被取出成為可能。
?、叟咛ヒ浦膊淮嬖诿庖邌栴}受體母畜的生殖道(子宮和輸卵管)對于具有外來抗原物質(zhì)的胎盤和胎膜組織，在同一物種之內(nèi)，無排斥現(xiàn)象。
?、芘咛ズ褪荏w之間建立有效聯(lián)系，保證胎兒以后的正常發(fā)育。
?、菖咛サ倪z傳特性不受受體的影響。
(2)胚胎移植的基本原則
?、倥咛ヒ浦睬昂笏幁h(huán)境的同一性
a.供體和受體在分類學上的相同屬性，即兩者須屬于同一物種。
b.動物生理上的一致性。即受體和供體在發(fā)情時間上的同期性，一般要求相差24小時以內(nèi)。
c.動物解剖部位的一致性。即移植后的胚胎與移植前所處的空間環(huán)境相似性。
?、谂咛グl(fā)育的期限胚胎采集和移植的期限(胚胎的日齡)不能超過周期黃體的壽命，最快要在周期黃體退化之前數(shù)日進行移植。通常在供體發(fā)情配種后3～8天收集胚胎，受體同時接受移植。
?、叟咛サ馁|(zhì)量胚胎不應受到任何不良因素(物理、化學和微生物等)的影響而危及生命力，必須經(jīng)過鑒定確認為正常者。
?、芄┦荏w的狀況供體的生產(chǎn)性能，經(jīng)濟價值均須大于受體，兩者均須健康無病。此外，還需強調(diào)的是胚胎移植只是空間位置的變換，而不是生理環(huán)境的改變。
