日本圓葉海棠(MalusprunifoliaBorkhvar．ringoAsami)，別名丸葉海棠，是日本培育蘋果苗木中廣泛應(yīng)用的一種基砧，其顯著特點(diǎn)是扦插繁育能力強(qiáng)，扦插成活率可達(dá)90％以上。經(jīng)過組培脫毒的圓葉海棠生長(zhǎng)量大，抗逆性強(qiáng)，嫁接親和性好，具有更穩(wěn)定的生長(zhǎng)勢(shì)，用圓葉海棠扦插繁殖取代實(shí)生播種繁殖是蘋果育苗中的一次革命。本文建立的Et本圓葉海棠快繁體系，可在短期內(nèi)獲得大量無(wú)毒無(wú)性系砧木，實(shí)現(xiàn)周年生產(chǎn)，滿足蘋果苗木生產(chǎn)對(duì)砧木的需求。
1培養(yǎng)條件
①誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS+6-BA0．3mg／L+NAA0．03mg／L；②增殖培養(yǎng)基：MS+6-BA0．2mg／L+NAA0．02mg／L；③壯苗培養(yǎng)基：MS+6-BA0。1mg／L+NAA0．02mg／L；④生根培養(yǎng)基：1／2MS+IBA0．1mg／L+IAA0．2mg／L。前3種培養(yǎng)基均加蔗糖35g／L，生根培養(yǎng)基蔗糖為23g/L，pH值5．8，培養(yǎng)溫度為25。t2，光照強(qiáng)度為1500～2000Lx，光照時(shí)間為14小時(shí)／天。
2生長(zhǎng)與分化情況
2．1無(wú)菌材料的處理
選取日本圓葉海棠春季萌發(fā)抽生的新梢莖尖或帶腋芽的莖段，剪成長(zhǎng)3～5cm的莖段置于三角瓶中，先用少許洗衣粉浸洗2～3分鐘，然后用自來(lái)水沖洗到?jīng)]有泡沫為止，在超凈工作臺(tái)上，用0．1％HgCl：消毒8分鐘，再用無(wú)菌水淋洗5～6次，濾紙吸干水分，剪成長(zhǎng)1～2cm的單芽莖段或帶幾個(gè)較小葉片的莖尖，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。
2．2不定芽的分化及叢生芽增殖
芽在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)20天后開始萌動(dòng)，伸長(zhǎng)成無(wú)菌苗。在無(wú)菌條件下，將上述伸長(zhǎng)苗再切段，每段1～2個(gè)芽，接人增殖培養(yǎng)基中，30天后可產(chǎn)生大量叢生芽，將叢生芽再切段，接種在相同培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)。增殖系數(shù)為7～8。
2．3壯苗培養(yǎng)
在增殖培養(yǎng)基中，獲得大量的叢生芽，但芽分化較多，植株生長(zhǎng)較細(xì)弱，因此，將經(jīng)過繼代增殖的小植株，在生根前接種在壯苗培養(yǎng)基中，進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，獲得健壯的無(wú)根試管苗。
2．4誘導(dǎo)生根及移栽
取株高2．5～3cm小苗接種到生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)2周左右，生根率達(dá)98％。然后在調(diào)控溫室馴化生根20天，當(dāng)試管苗根長(zhǎng)2～3cm、莖干微呈紅色、葉大而濃綠時(shí)，開口練苗3天，然后用鑷子夾出試管苗，栽入已配好營(yíng)養(yǎng)土(珍珠巖、麥茬土和河沙按l：2：1混合)的六棱型營(yíng)養(yǎng)缽中，用0．1％多菌靈消毒后，保持80％的濕度，兩周后開始長(zhǎng)出新根和新葉，成活率達(dá)86％。當(dāng)長(zhǎng)出2～4片真葉時(shí)開始移人大田，成活率達(dá)98％。
1培養(yǎng)條件
①誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS+6-BA0．3mg／L+NAA0．03mg／L；②增殖培養(yǎng)基：MS+6-BA0．2mg／L+NAA0．02mg／L；③壯苗培養(yǎng)基：MS+6-BA0。1mg／L+NAA0．02mg／L；④生根培養(yǎng)基：1／2MS+IBA0．1mg／L+IAA0．2mg／L。前3種培養(yǎng)基均加蔗糖35g／L，生根培養(yǎng)基蔗糖為23g/L，pH值5．8，培養(yǎng)溫度為25。t2，光照強(qiáng)度為1500～2000Lx，光照時(shí)間為14小時(shí)／天。
2生長(zhǎng)與分化情況
2．1無(wú)菌材料的處理
選取日本圓葉海棠春季萌發(fā)抽生的新梢莖尖或帶腋芽的莖段，剪成長(zhǎng)3～5cm的莖段置于三角瓶中，先用少許洗衣粉浸洗2～3分鐘，然后用自來(lái)水沖洗到?jīng)]有泡沫為止，在超凈工作臺(tái)上，用0．1％HgCl：消毒8分鐘，再用無(wú)菌水淋洗5～6次，濾紙吸干水分，剪成長(zhǎng)1～2cm的單芽莖段或帶幾個(gè)較小葉片的莖尖，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。
2．2不定芽的分化及叢生芽增殖
芽在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)20天后開始萌動(dòng)，伸長(zhǎng)成無(wú)菌苗。在無(wú)菌條件下，將上述伸長(zhǎng)苗再切段，每段1～2個(gè)芽，接人增殖培養(yǎng)基中，30天后可產(chǎn)生大量叢生芽，將叢生芽再切段，接種在相同培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)。增殖系數(shù)為7～8。
2．3壯苗培養(yǎng)
在增殖培養(yǎng)基中，獲得大量的叢生芽，但芽分化較多，植株生長(zhǎng)較細(xì)弱，因此，將經(jīng)過繼代增殖的小植株，在生根前接種在壯苗培養(yǎng)基中，進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，獲得健壯的無(wú)根試管苗。
2．4誘導(dǎo)生根及移栽
取株高2．5～3cm小苗接種到生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)2周左右，生根率達(dá)98％。然后在調(diào)控溫室馴化生根20天，當(dāng)試管苗根長(zhǎng)2～3cm、莖干微呈紅色、葉大而濃綠時(shí)，開口練苗3天，然后用鑷子夾出試管苗，栽入已配好營(yíng)養(yǎng)土(珍珠巖、麥茬土和河沙按l：2：1混合)的六棱型營(yíng)養(yǎng)缽中，用0．1％多菌靈消毒后，保持80％的濕度，兩周后開始長(zhǎng)出新根和新葉，成活率達(dá)86％。當(dāng)長(zhǎng)出2～4片真葉時(shí)開始移人大田，成活率達(dá)98％。
