關(guān)鍵詞：荷包豬；MyoG基因；PCR-SSCP分析；肉質(zhì)

　　荷包豬是東北民豬的一種，主要分布在遼寧、吉林和黑龍江3省。全身黑色，冬季生絨毛，鬃毛質(zhì)量好，體質(zhì)強健。面長直，耳大下垂。背膘平或微凹，胸深，四肢粗壯，臥系。后軀狹窄，傾斜?？购芰?，適應性強，耐粗飼，善奔跑，常年發(fā)病率低，肉質(zhì)鮮美。

　　肌細胞生成素（Myogenin，MyoG）是調(diào)節(jié)骨骼肌發(fā)育的重要因子，MyoG是生肌決定因子（Myogenin determination gene，MyoD）基因家族的成員之一。而生肌決定因子MyoD（也稱肌肉調(diào)節(jié)因子muscle regulatory factory，MRF）基因家族編碼4個明顯不同的肌肉特異性轉(zhuǎn)錄因子：MyoD、MyoG、Myf5和MRF4，他們代表著控制骨骼肌生成很多方面的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。其中，MyoG基因是MyoD 基因家族中唯一在所有骨骼肌細胞系中均可表達的基因，起到關(guān)鍵調(diào)節(jié)的作用。目前，國外對豬MyoG基因的多態(tài)性進行了較多研究，例如，Ernst等（1998）首先分析了豬MyoG基因的遺傳變異，他們發(fā)現(xiàn)長度為4.9kb和4.2kb DNA片段為多態(tài)性片段，又在4個二代家系和三代家系中發(fā)現(xiàn)含4.9kb和4.2kb片段的MyoG等位基因分離符合孟德爾分離定律。對8個品種無親緣關(guān)系的83頭豬的MyoG等位基因的頻率進行檢測，發(fā)現(xiàn)含4.9kb和4.2kbDNA片段的MyoG等位基因出現(xiàn)頻率分別為0.42%和0.58%。TePas等（1996）發(fā)現(xiàn)MyoG基因有3個變異位點：一個為梅山豬所特有，一個為荷蘭長白豬和杜洛克豬所特有，另一個為所有研究的豬種共有的變異位點；初步研究表明這些變異位點與豬初生重、肌纖維數(shù)有關(guān)。近些年來，隨著對豬MyoG基因的研究的不斷深入，已經(jīng)取得了一些新進展。MyoG基因作為改善豬肉類品質(zhì)重要的候選基因，我們有必要對其進行深入研究。

　　1 材料與方法

　　1.1 材料

　　本試驗所用優(yōu)質(zhì)純種荷包豬和長白豬均由葫蘆島市建昌縣民盛荷包豬養(yǎng)殖場提供。采用耳靜脈采血。所有的試驗豬均采血2mL左右。將血液放入有10%EDTA抗凝的離心管中并分別編號。采用PCR-SSCP技術(shù)分析，對所有試驗豬進行MyoG基因型的檢測，然后選取體重大約在75kg的各個基因型純種荷包豬進行試驗。

　　1.2 引物的設(shè)計

　　本次試驗引用（Ann Soumillion，等，1996）年設(shè)計的引物，由沈陽寶泰克生物工程有限公司合成提供。引物序列為：

　　引物1，R1:5’-GGA ATT CCA TGG AGC TGT ATG AAC ATC-3’

　　F2:5’-TCC GGC TCC TCC CTG GTT GA-3’

　　引物2，R1:5′-TCA GGA AGA ACT GAA GGC TG-3′

　　F2: 5′-GTT TCC TGG GGT GTT GC -3’

　　1.3 PCR-SSCP 分析

　　PCR擴增體系50μL。擴增條件：預變性溫度為93℃、3min。變性93℃、35S，退火溫度為61℃、30S。72℃延伸30S。

　　取PCR產(chǎn)物，加入變性劑、石蠟油，煮沸5min，取出立刻放入冰浴中8min以上，再全部上樣，10～15℃（具體溫度依試驗而定，不能太高）下電泳。開始在220V電壓下電泳10min，然后在140V（電壓不能高于120，否則有可能使條帶跑彎）電泳12h，取下凝膠，進行銀染，最后進行數(shù)碼照相。

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　　　2 試驗結(jié)果

　　2.1 PCR擴增結(jié)果

圖1 MyoG exon1-1（1）的PCR擴增結(jié)果（bp）

圖2 MyoG exon1-1（2）的PCR擴增結(jié)果（bp）

　　2.2 PCR-SSCP的檢測結(jié)果

圖3 MyoG SSCP的檢測結(jié)果

　　　圖3中，PCR擴增產(chǎn)物的SSCP檢測結(jié)果：4、6、7、10為AA基因型；1、2、5、8為AB基因型；3、9為BB基因型。

　　2.3 結(jié)果統(tǒng)計

　　由表1可知，MyoG基因的多態(tài)性對荷包豬滴水率的影響未到達顯著效果（P>0.05）。

　　對嫩度的影響達到了顯著水平（P<0.05）。AA型基因的嫩度值最大，AB型基因的嫩度最小，BB型基因的嫩度介于兩者之間。

　　在對大理石紋方面的影響上沒有達到顯著水平（P>0.05）。在肌內(nèi)脂肪方面其影響達到了顯著水平（P<0.05），AB型基因的荷包豬肉中其含量最高比AA型基因和BB型基因的含量分別高出了0.16%和0.29%。

　　對pH值的影響，MyoG基因的多態(tài)性對45min時pH值的影響沒有達到顯著水平（P>0.05）。但是對24h時的pH值的影響達到了顯著效果（P<0.05），但是均在正常值的范圍之內(nèi)。表1 MyoG基因的多態(tài)性對荷包豬肉質(zhì)的影響

　　注：同行肩標注不同小寫字母表示差異顯著（P＜0.05），標有相同字母表示差異不顯著（P＞0.05）。下同。

由表2分析可以得出，在纖維面積、纖維直徑和肌纖維密度方面，AA型基因、AB型基因和BB型基因的荷包豬肉3者之間都達到了顯著水平（P<0.05）。

表2 MyoG基因的多態(tài)性荷包豬肌纖維組織學結(jié)構(gòu)的影響

　　3 討論

　　3.1 MyoG基因的多態(tài)性

　　本次試驗選用了荷包豬和長白豬為對象，通過PCR-SSCP進行MyoG基因多態(tài)性分析，結(jié)果在外顯子Ⅰ片段內(nèi)出現(xiàn)多態(tài)性，結(jié)果同Soumillion等（1997）用PCR-RFLP方法進行MspⅠ酶切，共發(fā)現(xiàn)了3個位點相同。

　　3.2 MyoG基因?qū)ωi肉質(zhì)指標的影響

　　滴水率是反映豬肉系水力的指標，是度量不加任何外力豬肉的液體流失狀況。由試驗結(jié)果可以看出AB型基因荷包豬的滴水率明顯低于其他兩種，這說明AB型基因荷包豬肉的保水能力強。目前對豬肉嫩度的研究發(fā)現(xiàn)，品種和遺傳因素對肉的嫩度影響很大。我國地方豬種肉質(zhì)優(yōu)良、肌纖維較細，肌內(nèi)脂肪一般含量在3%以上，甚至在6%～7%，肉質(zhì)鮮嫩、多汁，而外來品種由于對瘦肉率的過度選擇已使肌內(nèi)脂肪含量下降為1%～1.5%，遠遠低于最佳范圍，因此肉質(zhì)較粗糙。本次試驗的結(jié)果也同樣證明了地方豬種荷包豬的嫩度比引進豬種長白豬的嫩度好，且均達到了顯著水平。最嫩的都為AB型的豬。肌內(nèi)脂肪的含量直接影響著肉的嫩度和大理石紋，肌內(nèi)脂肪荷包豬中含量最高的為AB型，這說明不相同基因在同豬種中作用有所區(qū)別，在大理石紋方面MyoG基因的多態(tài)性對荷包豬肉的影響沒有達到顯著水平。

　　pH值是作為評價劣質(zhì)肉的標準（曾勇慶等，1990）。MyoG基因的多態(tài)性對肉45min時的pH值的影響不大，荷包豬沒有達到顯著的水平。但是對24h時的pH值的影響均達到了顯著的水平，但是均在正常范圍之內(nèi)。因此，說明MyoG基因的3種基因?qū)H值的影響不大。

　　根據(jù)以往的一些研究表明，肌纖維越細豬的肉質(zhì)越嫩（羅軍，1989）。很多研究表明，我國的地方豬種肌纖維直徑比引進豬種要細，因此，地方豬種的肉的嫩度較引進豬種要好。（楊博輝等，2001）分別對九龍牦牛和大通牦牛肌肉纖維直徑進行研究，發(fā)現(xiàn)肌纖維直徑與肉品的柔嫩度呈現(xiàn)曲線相關(guān)。

　　3.3 MyoG基因?qū)ωi肉肌纖維組織學結(jié)構(gòu)的影響

　　本次試驗在荷包豬肉中纖維面積最大的為BB型，且3者之間達到了顯著水平；纖維直徑最大為AB型，3者達到顯著水平；肌纖維密度最大的為BB型荷包豬，3者之間也達到了顯著水平，且荷包豬肉的纖維直徑和纖維面積均小于長白豬，更加說明了荷包豬的肉質(zhì)嫩度好于引進豬種長白豬的。